כיצד לגדל תאי תרחיף במעבדה?

כפי שכולנו יודעים, ניתן לחלק באופן גס את סוגי התאים המתורבתים במעבדה לשני סוגים: תאים נצמדים ותאי מתלה, ורק סוגים בודדים של תאים קיימים בשני המצבים.

תאים מרחפים מתייחסים לסוג של תאים שיכולים לגדול במצב מרחף במדיום מבלי להסתמך על תומכים, כגון לימפוציטים ורוב התאים שמקורם במערכת הדם. (כגון תאי לוקמיה של עכברים WEHI-3, תאי לוקמיה אנושיים K-562, HL-60). בתעשייה, יותר ויותר תאים דביקים בויתו והורבתו בהשעיה מלאה. כיום, תאי SP2/0, NS0, CHO, BHK ו-HEK293 משמשים בעיקר בתעשייה, והם משמשים בעיקר לייצור חלבון רקומביננטי; תאי המעבר הנפוצים במוצרים ביולוגיים וטרינרים כוללים בעיקר תאי BHK21 בתרבית בתרחיף מלא, תאי MDCK; ותאי Vero, תאי PK, תאי ST, תאי Marc145 וכו' בעזרת תרבית תרחיף מיקרו-נשאים, לכל תא מאפיינים שונים.

תאי השעיה

תאי השעיה "thp-1" פי 200

באופן כללי, קל יותר לטפל בתאי ההשעיה מאשר בתאים נצמדים מכיוון שלא נדרשת טריפסיניזציה למעבר של תאי ההשעיה. אבל זה לא אומר שקל יותר לגדול תאי ההשעיה מאשר תאים נצמדים. עבור טירונים, זה יותר מאתגר. תמיד יש בעיות שונות: למשל, למה תמיד מופיעים תאים מתים והתמיינות תאים; מוסכם שהמעבר קל, אבל התוצאה תהיה בידול; בעיות מופיעות שוב לאחר שימור והחלמה בהקפאה!

לאחר מכן, בואו נדון בכמה נקודות מפתח לגבי טיפוח תאי השעיה ~

נקודה 1: מספיק סבלנות, זה מאוד הכרחי

לתאי השעיה רבים יש כדאיות ירודה יחסית כאשר הם רק מוחזרים משימור הקפאה. בשלב זה, עלינו להיות סבלניים מספיק כדי להמתין עד שהתאים ישלימו את התיקון העצמי שלהם ויכנסו לשלב הצמיחה הלוגריתמי. לדוגמה, THP-1 (לוקמיה מונוציטית אנושית) זקוקה לרוב ל-7-10 ימים של תקופת החלמה מהפשרה ועד לשגשוג רגיל; Jurkat, Clone E6-1 (תאי לוקמיה לימפוציטית מסוג T אנושיים) זקוקים גם ל5-7 ימים לאחר ההחלמה. לחזור למצב לפני ההקפאה. טירונים עשויים לוותר על הכשרה בתקופה זו, אז אנא היו סבלניים יותר! טיפוח תאים כאלה הוא גם תהליך של טיפוח סבלנות!

נקודה 2: תפוס את צפיפות החיסון

באופן כללי, צפיפות תאי ההשעיה לא צריכה להיות נמוכה מ-500,000/ML. תאי מתלה רבים תלויים בצפיפות, ואי-התפשטות הנגרמת על ידי צפיפות נמוכה היא גם אחת הבעיות הנפוצות עבור טירונים. כמובן, ישנם מעט מאוד תאים שמצבם מחמיר כאשר הצפיפות גבוהה, כגון W6/32 (תאי B cell hybridoma עכבר). לכן, חשוב מאוד לחפש מידע רלוונטי כדי להבין את המאפיינים של תאים לפני טיפוח תאים לא ידועים. רק על ידי הכרת עצמך ואת האויב תוכל לנצח בכל הקרבות!

אין להגביל את תדירות ההחלפה הבינונית ל"ברור". תאים הם יצורים חיים. במהלך מחזור תרבית מתמשך, ניתן להוסיף חומרים מזינים ספציפיים כמו תוסף תוספת וגלוקוז מספר פעמים בהתאם למצב הגדילה של התאים כדי לשמור על מצב גדילה טוב של התאים. . במהלך תהליך תרבית התרחיף, עם ריבוי התאים, צריכת חומרי הזנה במדיום המקורי והגברת המטבוליטים, תפחת הכדאיות של התאים, והשלמה בזמן של חומרי הזנה תהפוך את התאים לסביבת חיים טובה יחסית. לא אכנס כאן לפרטים, ואמנע מצנטריפוגה תכופה והחלפת נוזלים.

בואו נדבר על שיטת החלפת הנוזל:

①שיטת החלפת נוזלים מלאה צנטריפוגלי‍

כלומר, הסר את כל המדיום הישן על ידי צנטריפוגה (800-1000סל"ד, 5 דקות), והחלף במדיום טרי. שיטה זו מתאימה להחלפה בינונית של תאי תרחיף "סולידי עור" מוגבהים היטב (כגון K562), או למצב הנוכחי שבו התאים במצב טוב והצפיפות גבוהה, וכתוצאה מכך צריכה גדולה של מדיום. היתרון בשיטה זו הוא שהמדיום משתנה ביסודיות וניתן להסיר חלק מהפסולת של התאים, אבל זה גם יגרום מידה מסוימת של נזק מכני לתאים.

②שיטת חצי החלפה צנטריפוגלי

כלומר, על ידי צנטריפוגה (800-1000סל"ד, 5 דקות) תרחיף תאים של 50 אחוז, החלף נפח של 50 אחוז של מדיום טרי. שיטה זו מתאימה להשוואת תאים "צבועים" הקשים לתרבית (כגון thp-1), או למצב בו הצפיפות נמוכה אך יש צורך להסיר יותר פסולת במצב ההתאמה.

③ שיטת החלפת נוזלים בשקיעה

כלומר, במקום שימוש בצנטריפוגה, שיטת השקיעה הטבעית על ידי כוח הכבידה משמשת להפרדת התווך מהתאים, כדי להחליף את המדיום הטרי כולו או חלקו. עם זאת, יש לו מגבלות יישום - הוא מתאים רק לתאים שיכולים ליצור צבירי תאים בגודל מסוים (אחרת הם לא יכולים להתיישב באופן טבעי וניתן לצנטריפוגה רק במהירות נמוכה), במיוחד כשמדובר בתאים המסתמכים על צבירת תאים כדי להתרבות. , כגון NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. שיטה זו יכולה למזער את הנזק המכני הנגרם מתהליך הצנטריפוגה במהלך תהליך החלפת הנוזלים, תוך שמירה על מסת התא המצטברת, ופינוי פסולת התא הוא יסודי יחסית.

לאחר שליטה בנקודות לעיל, בתוספת זרע טוב של תאים, זה ממש מעבר לפינה לגדל תאי תרחיף "יפים"!

צלחת תרבית תאים

צלחת תרבית תאים בצורת U של Yongyue Medical משמשת בעיקר לגידול תאי תרחיף, באמצעות פוליסטירן בדרגה רפואית (PS), המיוצרת בבית מלאכה לטיהור של 100,000-רמות, מעוקרת על ידי הקרנה, ללא DNase, RNase ופירוגן -חינם, בטיחות והגנה על הסביבה.

צלחות תרבית תאים זמינות במפרטים שונים כדי לענות על הצרכים של תרביות חיידקים שונות. סוגי המוצרים מחולקים ל-6-טוב, 12-טוב, 24-טוב, 48-טוב, 96-טוב ו-384-טוב, של אשר 96-הבאר מחולקת לתחתית שטוחה, תחתית U, תחתית V; לוחות תרבות בצורת U משמשים בעיקר לגידול תאי השעיה; צלחות תרבות בצורת V משמשות בעיקר לניסויים אימונולוגיים בהמגלוטינציה.