כפי שנאמר, אם עובד רוצה לעשות עבודה טובה, עליו קודם כל לחדד את הכלים שלו. בחירת החומרים המתכלים חשובה מאוד כדי להשיג תוצאות משביעות רצון של ניסוי PCR. בעת ניתוח תוצאות PCR, אנו מתמקדים לעתים קרובות בניתוח של פריימרים, ריכוז אנזימים, טמפרטורה וזמן, אך מתעלמים מכך שחומרי PCR מתכלים הם גם אחד הגורמים המשפיעים. ישנם סוגים רבים של מתכלים ל-PCR, כיצד לבחור את המתכלים הנכונים ל-PCR? הנה כמה שאלות שיעזרו לך למצוא את התשובה שלך.
חומרים מתכלים של pcr
1. מדוע חומרים מתכלים PCR עשויים בדרך כלל מ-PP?
בין אם מדובר ב-PCR רגיל ובין אם מדובר ב-PCR כמותי פלואורסצנטי בזמן אמת (qPCR), בדרך כלל החומרים המתכלים שלו יהיו במגע ישיר עם ריאגנטים או דגימות, ולכן נדרשים חומרים איכותיים וטכניקות עיבוד טובות בתהליך הייצור וההכנה. חומרים מתכלים כלליים עשויים מפוליפרופילן (PP). פוליפרופילן (PP) הוא חומר אינרטי ביולוגית, פני השטח אינם קלים להדבקה לביומולקולות, ויש לו עמידות כימית טובה וסובלנות לטמפרטורה.
2. איך בוחרים צינורות/צלחות PCR בנפחים שונים?
נפחים נפוצים עבור צינורות/צלחות PCR:
• שפופרת בודדת/{{0}}שפופרת/12-שפופרת: 0.5mL, 0.2mL, 0.1mL
• {{0}}צלחת באר: 0.2mL, 0.1mL
• {{0}}צלחת באר: 0.02 מ"ל
מפרטים עבור צינורות/צלחות PCR:
בחר את המוצר המתאים בהתאם לדרישות הניסוי הספציפיות. הנפח של רוב צינורות ה-PCR יכול לעמוד בדרישות של תגובות PCR. מפרטי הקיבולת זמינים בקיבולת סטנדרטית ובקיבולת נמוכה. בדרך כלל, מומלץ לבחור תחילה בצינורות בעלי קיבולת נמוכה. מכיוון שלצינורות/צלחות הכור בנפח נמוך יש פחות מרווח ראש, העברת החום משתפרת והאידוי מופחת. יחד עם זאת, יש להימנע מהוספת יותר מדי או מעט מדי דגימה בעת הוספת דוגמאות. יותר מדי עלול להוביל לירידה במוליכות תרמית, לדליפה ולזיהום צולב, בעוד שמעט מדי עלול לגרום לאובדן אידוי של הדגימה.
3. מה ההבדל בין הכיסוי השטוח/הכיסוי הקמור של צינור בודד או צינור 8-שורה?
כאשר נפח הדגימה קטן, עדיפים צינורות בודדים או צינורות {{0}}. עם זאת, כאשר דרישת נפח התגובה גדולה, צינורות בודדים שוררים, והנפח יכול להגיע ל-0.5 מ"ל. ישנם שני סוגים של צינור יחיד וצינור 8-עם כיסוי שטוח וכיסוי קמור, לכל אחד יש יתרונות משלו. מכסה שטוח מספק אספקת אותות ניאון מדויקת עבור qPCR; קל לכתוב על טושים. הכיסוי הקמור נמצא במגע עם מכסה מכשיר ה-PCR כדי להפחית את עיוות הצינור הנגרם מלחץ; עם זאת, זה ישפיע על העברת אותות ניאון ולא ניתן להחיל אותו על ניסויי qPCR.
4. מהם ההבדלים בתרחישי השימוש של 96-צלחות בארות שונות?
96-צלחות טובות מחולקות בדרך כלל לצלחות ללא חצאיות, צלחות חצאיות למחצה וצלחות עם חצאית מלאה.
צלחות ללא חצאיות: תואמות לרוב המחזורים התרמיים או מכונות qPCR, אך אינן מתאימות ליישומים אוטומטיים. היציבות אינה גבוהה במהלך תהליך הפיפטציה, ויש להשתמש בו עם מחזיק לצלחת.
צלחת חצאית למחצה: ניתן להתאים אותה לתיוג או להחיל ברקוד, וליישום אוטומטי, ויש לה יציבות טובה לפיפטינג.
פלטת חצאית מלאה: מתאימה מאוד ליישומי מעבדה אוטומטיים, אך מתאימה גם ליישומי תוויות ויישומי ברקוד. חוזק מכני טוב, מתאים למכונות PCR עם מודולים בולטים, ויציבות גבוהה בזמן פיפטציה.
5. האם חומר צלחת/צינור PCR עבה ויציב יותר?
לא. חומרים מתכלים של PCR חייבים להיות בעלי עובי דופן אחיד כדי לספק העברת חום עקבית. דופן הצינור הדק במיוחד דק יותר ב-50 אחוז מהגרסה הרגילה, מה שיכול להפחית עוד יותר את המחסום התרמי, וכתוצאה מכך תגובה מהירה וטובה יותר.
6. עבור צלחות 96- well או 384- well, מדוע הפינות והתוויות החתוכות אינן זהות?
חיתוך פינתי: הבחירה במיקום החיתוך הפינתי של לוחית ה-PCR תלויה בדרישות המכשיר המותאם למיקום קל.
זיהוי: סימונים אלפאנומריים על לוחות PCR עוזרים לזהות בארות בודדות ומיקומי דגימות. בדרך כלל, זהו לוגו מספר צבע מוגבה או לוגו חרוט. עבור כמה ניסויים ביישום אוטומטי, לוח התגובה עם סימנים מוטבעים יהיה אטום טוב יותר.
7. כמה בארות צלחת PCR בולטות, בעוד אחרות שטוחות. איזה יותר טוב?
מה שמתאים זה טוב. לצלחות PCR נפוצות יש שני סוגים: קצוות באר שטוחים וקצוות באר מוגבהים. לוח תגובה עם קצה באר שטוח, מתאים לרוב הרוכבים התרמיים. צלחת התגובה על קצה חור העלייה נוחה לאיטום, מה שיכול להפחית את הסיכון של זיהום צולב בין דגימות.
8. איך בוחרים צינורות/צלחות PCR בצבעים שונים?
עבור תגובות PCR רגילות, ניתן להשתמש בשקופות. בתגובת PCR בזמן אמת, הרגישות והעקביות של הצינור הלבן גבוהים יחסית. קירות הצינור הלבנים מונעים מהפלורסצנטי לעבור דרך דפנות הצינור ושבירה, ובכך מונעים מהפלורסצנטי לעבור למודול החימום, להיספג במודול או להשתקף באופן לא עקבי. בהשוואה לצינורות שקופים, ניתן לאסוף אותות פלואורסצנטי חזקים וממוקדים יותר בחלק העליון של צינורות לבנים.
