לוחות תרבית תאים נמצאים בשימוש נפוץ ומוצרים מתכלים חשובים בניסויים בתרבית תאים מכיוון שהם יכולים לחסוך זמן וחומרי ריאגנט לניסויים בתאים, ויכולות להגדיר מספר משתנים דינמיים בו-זמנית כדי להקל על תצפית וזיהוי.
צלחת תרבות
1. המכסים של צלחות תרבות 96, 24-בכן או צלחות פטרי רופפים מאוד, וזה נוח לאוורור, אבל האם גם חיידקים, עובשים ומזהמים אחרים יחליקו פנימה?
תשובה: (1) הכריכה רופפת מאוד ושייכת לתרבות חצי פתוחה. המטרה של זה היא לנשום (למעשה, כדי לאפשר החלפה מלאה של ה-CO2 מחוץ לצלחת התרבית עם צלחת התרבות כדי לשמור על ערך ה-pH של המדיום).
(2) ישנם יתרונות וחסרונות, מה שמגדיל את האפשרות לזיהום. בנוסף, הדבר גורם לאידוי הנוזל בצלחת הפטרי, דבר הבולט במינון מדויק של תרופות. אז שני האמצעים הבאים נחוצים:
א) האוויר בחממה חייב להיות נקי (אור אולטרה סגול רגיל, קרצוף אלכוהול, ויש להפעיל ולכבות את האינקובטור כמה שפחות)
ב) יש לשמור על הלחות באינקובטור על 100 אחוז כל הזמן (כיור בו שמים מים מזוקקים סטריליים באינקובטור). שימו לב לפעולה אספטית!
2. התאים שלי מחוסנים על צלחת התרבית, והתאים תמיד מתאספים בחלק ההיקפי. מה עלי לעשות? אני רואה שתאים של כמה חברים לנשק מכונסים באמצע. האם יש בעיה באיכות הצלחת?
ת: איך אתה מערבב את התאים שלך? האם זו נושבת פיפטה או ניעור צלחת התרבית? אם זה האחרון, והוא מנער במעגל, סביר מאוד שהתאים ייזרקו לחלק שמסביב בגלל הכוח הצנטריפוגלי, וכתוצאה מכך באמצע התאים. פחות, יותר מארבעה שבועות! אתה יכול לנסות את זה בעצמך!
דרך טובה: לפני שאתם מטפחים את צלחת הזרעים, הכניסו את צלחת התרבית לתוך האינקובטור לכמה שעות של רוויה ואז הוציאו אותה. בעת זריעת התאים, הכוח צריך להיות קל. אתה יכול להשתמש בטפטף בצד חור צלחת התרבות באיטיות הוסף כדי לאפשר השעיה התא לזרום לתוך בארות של הצלחת, ואת התאים בתרבית לגדול באופן אחיד באופן משמעותי. זכור לעולם לא לנער את המתנד או שהתאים שלך יתקבצו יחד כמו שאמרת.
3. התאים שלי עוברים כרגיל, אבל כשסוג אחד נכנס לצלחת עם שש בארות (ללא קשר לתוספת ובקרה של תרופה), תמיד יש שתיים או שלוש בארות (אקראי) תאים שאינם גדלים היטב, קטנים ונראים להיות שבור. האם מישהו נתקל בזה? מה הסיבה?
ת: יכול להיות שזה קשור לטמפרטורה של הנוזל שאתה מוסיף. אם זה עתה הוציאו את התאים שלכם כדי להחליף את המדיום ולהוסיף את המדיום, וגם את המדיום מוציאים מהמקרר 4 מעלות בקרוב, קל לתאים לקפוא למוות. מומלץ שתדגור את המדיום באינקובטור במשך 15 דקות תחילה.
בנוסף, זה קשור גם למצב הצמיחה של התאים שלך. ניתן להחדיר תאים לפני המינון בריכוז גבוה בסרום. ודא שהתאים במצב תקין.
לחלופין, ניתן להדגרה באמבט מים של 37-מעלה, או הבעיה של צלחת התרבית עצמה, אתה יכול לנסות צלחת תרבית אחרת. אפשרות נוספת היא בעיית מצב התא, התאם את ריכוז הסרום בעת זריעת הצלחת.
4. בימים האחרונים השתמשתי בצלחת תרבית עם שש בארים כדי לחסן תאים. לאחר תרבית במשך 24 שעות, שיניתי את המדיום. לפני החלפת המדיום, ראיתי שהתאים נדבקים לקיר, והמצב היה טוב מאוד. לאחר החלפת המדיום, השתמשתי במיקרוסקופ מיד. נצפה שכמעט מחצית מהתאים בכל באר הראו מצב של כמעט מוות. התאים נעשים קטנים מאוד ומייצרים הרבה פסולת, בעוד שהחצי השני של התאים תקינים, יש קו פרשת מים בין תאים לא תקינים לתאים נורמליים, חצי המעגל העליון טוב, חצי המעגל התחתון לא טוב, איך זֶה? מה הבעיה?
ת: אתה יכול לראות אם יש אחת מהסיבות הבאות
א. צלחת התרבות אינה ממוקמת אופקית;
ב. מה דעתך על מצע התרבות שלך, אם מצע התרבות יפוג, התאים לא יידבקו. נסה מדיום מוכן טרי
ג. יכול להיות שזו הבעיה של הצלחת. אין בעיה להחליף צלחת של מותג אחר או להשתמש בבקבוק התרבות.
ד. האם שמתם לב להשפעת המאוורר בעת החלפת המדיום, במיוחד כאשר ישנן צלחות תרבית רבות שצריך להחליף, קל לגרום לתאים להתכווץ ולהיקרע עקב איבוד רוח ומים. אם כן, יש להחליף את המדיום אחד אחד, ואל תחששו לבזבז את הפיפטה, שימו לב ליעילות הפעולה!
5. עברו ארבעה ימים מאז שהתאים עוכלו וחוסנו לצלחת של 24-באר, והחלק האמצעי של כל באר תמיד היה מלא. המדיום נשטף עם PBS כל יום, ואותו מצב התרחש כאשר המדיום הוחלף למחרת. הקצוות ארוכים היטב והמרכז מלא בתאים מתים?
תשובה: אם התאים צפופים מסביב ודלילים באמצע, יש בערך את הסיבות הבאות:
המדיום התווסף מעט מדי. בעיקר בגלל בעיית מתח הנוזל.
האם יש פחות מים בתחתית האינקובטור;
הרעד לאחר זריעת התאים היה יותר מדי. התאים מפוזרים מסביב בגלל כוח צנטריפוגלי.
המפתח לשאלה אם התאים מחולקים באופן שווה הוא שלכל סוג של תא יש הבדלים אינדיבידואליים, ויתכן שפעולות התא של אנשים אחרים לא יתאימו לך. אז אתה צריך לחקור בעצמך ולמצוא מערכת כללים שייחודיים לתאים שלך. יש לך את הניסיון הבא:
(1) יש לערבב את כל תרחפי התאים לזריעה בפיפטה לפני הזרעה.
(2) לפי הרישומים, נפח הנוזל של 24-צלחת הבאר הוא 1 מ"ל, למעשה, נפח של 1 מ"ל מספיק.
(3) בעת חיסון, הוסף את הדגימה לאט, וזכור לסובב מעט את קצה הפיפטה. לא ניתן להוסיף את הדגימה מהר מדי כדי למנוע מהצטברות תאים בנקודת הוספת דגימה אחת, ולשים לב להוספת דגימות בחלקים שונים, כלומר תוך הוספת האקדח הנייד. ראש, באופן מלאכותי לגרום לתאים להיות מופצים באופן שווה. פעולה זו משפיעה על פיזור שווה של התאים.
