אנחנו צריכים לשטוף את ערכת ה-PCR שמונה צינורות לאחר השימוש. ישנן מספר דרכים לנקות את ערכת PCR Octal. למה אני צריך לשים לב בעת השימוש בו?
עקרון שיטת הניסוי: קרום סיליקה ג'ל נקשר ל-DNA בתנאי מלח גבוה, ונפרד מ-DNA בתנאי מלח נמוכים. פריימרים, מונונוקלאוטידים, אנזימים, שמן מינרלי, יוני מלח וכו' מופרדים בתמיסת השטיפה המכילה DNA מכיוון שאין להם תכונות דומות ל-DNA.
חומרים ניסיוניים: מוצרי PCR, ריאגנטים, ערכות, ערכות ניקוי PCR, מכשירים, חומרים מתכלים, 96-צלחות הכנה ל-DNA לבאר, 96-צלחות בעלות עומק היטב, 96-צלחות בצורת V היטב
1. יצרן PCR שמונה צינורות מדבר על ההרכב, האחסון והיציבות של הערכה
1. הוראות, חומרים מתכלים: 96-צלחת להכנת היטב DNA, 96-צלחת של 1.6 מ"ל עם באר עמוק, 96-צלחת בצורת V היטב.
2. Buffer PCR-A: תמיסת קושרת DNA. אחסן סגור היטב בטמפרטורת החדר. אם מתרחשים משקעים, יש להמיס אותו באמבט חם ב-65 מעלות ולקרר אותו לטמפרטורת החדר לפני השימוש.
3. תרכיז מאגר W2: הסר את תמיסת המלח. לפני השימוש, הוסף אתנול לנפח המצוין על הבקבוק, ערבב היטב ואחסן בטמפרטורת החדר. ניתן להשתמש ב-100 אחוז אתנול או 95 אחוז אתנול מוחלט.
4. פלט: 2.5 mM Tris-HCl, pH 8.5, מאוחסן במצב סגור בטמפרטורת החדר.
2. היצרן של צינורות PCR שמונה צימודים מדבר על שלבי הפעולה
משתמשים יכולים לבחור לחץ שלילי או צנטריפוגה.
א.שיטת לחץ שלילי
1. חבר נכון את מכשיר הלחץ השלילי, הנח את צלחת הכנת ה-DNA של 96-באר על מכשיר הלחץ השלילי; הוסף פי 3 מאגר PCR-A ל-PCR, עיכול אנזים, תיוג אנזים או תמיסת ריאקציית רצף (אם המאגר PCR-A קטן מ-100 ul, הוסף 100 ul); מערבבים היטב ומעבירים לצלחת הכנת DNA של 96-באר, הפעל וכוון את הלחץ השלילי ל--25-30 אינצ'ים כספית, ושאוב באיטיות את התמיסה בצלחת.
2. הוסף 0.3 מ"ל של חיץ W2 וספוג את התמיסה. שטפו פעמיים עם 0.3 מ"ל של חיץ W2 באותו אופן.
אשר הוספת אתנול מוחלט לנפח המצוין של תרכיז Buffer W2 על בקבוק המגיב.
3. שמרו על הלחץ השלילי וחלצו את 96-צלחת הכנת ה-DNA של הבאר למשך 10 דקות.
4. טוחנים את צלחת הכנת ה-DNA של 96-באר 6 פעמים על הרקמה הסיבית הארוכה כשצינור הניקוז פונה כלפי מטה.
5. מניחים את צלחת הכנת ה-96-באר DNA על צלחת 96-בצורת V היטב, הוסיפו 25-30 אול מים או שחררו למרכז הממברנה, והניחו לעמוד למשך דקה. בטמפרטורת החדר. ה-DNA נפלטה באמצעות צנטריפוגה ב-3 000 xg למשך 5 דקות.
ב. צנטריפוגלי
1. הוסף 3 נפחים של Buffer PCR-A (אם Buffer PCR-A הוא פחות מ-100 ul, הוסף 100 ul) לתגובות PCR, עיכול, סימון אנזימים או רצף; מערבבים ומעבירים ל-96-באר DNA בצלחת הכנת הבאר 96-. מניחים את צלחת הכנת ה-DNA בצלחת 96-באר של 1.6 מ"ל באר עמוק, צנטריפוגה ב-1000 xg למשך דקה אחת והשליך את התסנן.
2. בצלחת הכנת 96-באר DNA, הוסף 0.3 מ"ל של חיץ W2, צנטריפוגה ב-1000×g למשך דקה אחת, והשליך את התסנין. שטפו שוב באותו אופן עם 0.3 מ"ל של חיץ W2. אשר הוספת אתנול מוחלט לנפח המצוין של תרכיז Buffer W2 על בקבוק המגיב.
3. הנח את צלחת הכנת ה-DNA של 96-באר בצלחת 96-באר של 1.6 מ"ל עם באר עמוק וצנטריפוגה ב-3 000×g למשך 10 דקות.
4. הנח את צלחת הכנת ה-DNA של 96-באר בצלחת תחתונה נקייה 96-בצורת V היטב, הוסיפו 25-30 אול מים או שחררו למרכז הממברנה, והניחו לעמוד למשך דקה אחת בטמפרטורת החדר. ה-DNA נפלטה באמצעות צנטריפוגה ב-3 000 xg למשך 5 דקות.
יצרני צינורות אוקטליים PCR מדברים על עניינים הדורשים תשומת לב:
1. חימום המנקה או המים ל-65 מעלות יכול לעזור לשפר את יעילות הפליטה.
2. מולקולות DNA הן חומציות, מומלץ לאחסן ב-2.5 mM Tris-HCl, pH 8.5 eluate.
