צעדים ואמצעי זהירות בתרבות תאים

1. התאוששות

●1. הוציאו את הקרויוביאל מהחנקן הנוזלי, הכניסו אותו מיד לאמבט מים של 37 מעלות, ונערו אותו מעט. לאחר שהנוזל נמס (בערך 1-1.5 דקות), הוציאו אותו, רססו מעט אלכוהול והניחו אותו על שולחן העבודה הנקי במיוחד.

●2. שאפו את תרחיף התאים לעיל לתוך צינור צנטריפוגה של 15 מ"ל מלא במדיום של 10 מ"ל (שטפו את צינור ההקפאה במדיום כדי לשטוף את כל התאים הנדבקים לקיר), וצנטריפוגה ב-1000 סל"ד למשך 5 דקות.

●3. שפכו את הסופרנטנט והוסיפו 1 מ"ל של מדיום כדי להשעות את התאים. נשאב לתוך צלחת פטרי בגודל 10 ס"מ המכילה 10 מ"ל של מצע תרבות ומנערים בעדינות קדימה ואחורה כדי להפוך את התאים בצלחת הפטרי לפזר שווה.

●4. סמן את סוג התא והתאריך, שם המטפח וכו', והנח אותו בחממת CO2 לטיפוח. לאחר שהתאים נצמדים לקיר, שנה את המדיום.

●5. שנה את המדיום כל 3 ימים.

2. מעבר

●1. מעבר כאשר כיסוי התא בצלחת התרבית מגיע ל-80 אחוז -90 אחוז.

●2. שאפו את המדיום המקורי.

●3. הוסף טריפסין מתאים (מספיק לכסות את התאים) ועכל במשך 1-2 דקות.

●4. לאחר עיגול התאים, הוסף נפח שווה של תווך המכיל סרום כדי להפסיק את העיכול.

●5. השתמש בפיפטה כדי להשעות את התאים על ידי פיפטציה.

●6. שאפו את התאים לצינור צנטריפוגה של 15 מ"ל וצנטריפוגה ב-1000 סל"ד למשך 5 דקות.

●7. שפכו את הסופרנטנט, הוסיפו 1-2מ"ל מדיום, ופוצצו את התאים.

●8. מעבירים את התאים למספר כלים בהתאם לסוג התא. בדרך כלל, ישנם 5 תאים סרטניים ו-3 תאים נורמליים. המשך לטפח.

3. Cryopreservation עכל את התאים וצנטריפוגה (שם). השעיו את התאים עם תמיסת ההקפאה המוכנה, והפיצו אותם לקוביות קריוביות מעוקרות, הניחו להם לעמוד מספר דקות, וציינו את סוג התא ותאריך ההקפאה. 4 מעלות למשך 30 דקות, -20 מעלות למשך 30 דקות, -80 מעלות למשך הלילה, ולאחר מכן הניחו בחנקן נוזלי לאחסון. הכנת תמיסה להקפאה: 70 אחוז מדיום מלא בתוספת 20 אחוז FBS בתוספת 10 אחוז DMSO. יש להוסיף DMSO לאט טיפה, תוך כדי טפטוף.