יישום בקבוק סרום
בקבוק הסרום עשוי מזכוכית בורוסיליקט בעלת מיצוי נמוך, והבקבוק השקוף חסר הצבע עומד בדרישות USP Type I ו-ASTM E 438 Type I Standard Class A. ניתן לבצע חיטוי ב-121 מעלות למשך 20 דקות, וניתן לחלקו ל-125 מ"ל. , 250 מ"ל, 500 מ"ל, 1 ליטר, 2 ליטר לפי הנפח.
בקבוק סרום הוא מיכל לאחסון סרום, העשוי בדרך כלל מחומר PET בתהליך ניפוח מתיחה בהזרקה. המדיום הוא חומר המזון הנדרש לצמיחת תאים. על פי המקור שלו הוא מתחלק למדיום סינטטי ומדיום טבעי, את שניהם ניתן לאחסן בבקבוקי סרום.
בקבוק סרום
מדיום טבעי:
המדיום הטבעי הנפוץ ביותר הוא סרום, בעצם סרום עגל. הסרום מכיל מגוון גורמי גדילת תאים, גורמים מעודדי הידבקות והחומרים הרב-פעילים שלהם. בשילוב עם מדיום סינטטי, תאים יכולים להתרבות ולגדול בצורה חלקה. יש לאחסן את הסרום בבקבוקי סרום מיוחדים ב--5 מעלות עד -20 מעלות.
מדיום סינטטי:
מדיום סינטטי מנוסח בקפדנות בהתאם לסוג וכמות החומרים הנדרשים על ידי התאים. ישנם סוגים רבים ורכיבים ידועים, מה שמקל על השליטה בתנאי ניסוי. מכיל פחמימות, חומצות אמינו, שומנים, מלחים אנאורגניים, ויטמינים, יסודות קורט וגורמי גדילת תאים. עם זאת, בהשוואה למדיום הטבעי, חלק מהמרכיבים הטבעיים הלא ידועים אינם ניתנים להחלפה ברכיבים כימיים ידועים. לכן, המדיום הסינטטי הבסיסי המשמש בתרבית תאים חייב להוסיף גם כמות מסוימת של רכיבי מדיום טבעי כדי להתגבר על התרבית הסינתטית. בסיס לא מספיק, הנוהג הנפוץ ביותר הוא הוספת סרום עגל.
צורת בקבוק הסרום מרובעת, קלה לתפיסה, עמידה בפני רוב קורוזיה חומצית ואלקלית, טמפרטורת ההתפרקות היא -70 מעלות, ועדיין יש לו קשיחות מסוימת ב--30 מעלות. זהו מיכל אריזה טוב, בין אם זה מדיום טבעי או תרבות סינתטית. ניתן לאחסן בבקבוקי סרום.
לבידוד, התרבות וזיהוי של תאי אבות אנדותל דם טבורי אנושיים והקמת פיגומי כלי דם תאיים בשיטת הקפאה-הפשרה משופרת
לחקור את היתכנות וערך היישום הקליני של תאי אבות אנדותל מבודדים ומתורבתים מדם טבורי אנושי.
שיטות: הדם הטבורי של העוברים שעברו ניתוח קיסרי מלא במחלקה למיילדות וגינקולוגיה, בית החולים המסונף הראשון של המכללה הרפואית בנגבו נאסף, הוכנס לבקבוק סרום המכיל 50U/ml הפרין בתנאים אספטיים, מאוחסנים בקופסת קרח של 4 מעלות, ומועברים לתאים בחדר התרבית, התאים החד-גרעיניים של דם טבורי הושגו באמצעות צנטריפוגה של גרדיאנט צפיפות. התאים החד-גרעיניים שהתקבלו חולקו לשני חלקים, ונוספו סרום עגל M199 מדיום (FCS-M199) ומדיום סרום עצמי M199 (AS-M199). והם נזרעו בכלי תרבות עם ובלי פיברונקטין אנושי (HFN) (מסומן כ: F(0), F(1), A(0), A(1)) בהתאמה. בוצעו אינדוקציה, בידול והרחבה במבחנה.
השינויים המורפולוגיים של תאים נצמדים במהלך כל תהליך האינדוקציה וההתמיינות נצפו, והם זוהו מזוויות שונות בשילוב עם טכניקות קשורות כגון אימונוהיסטוכימיה, אימונופלואורסצנציה וציטומטריית זרימה.
תוצאות: לאחר 12 ימי תרבית, תאים חד-גרעיניים בדם טבורי החלו להיצמד. לאחר 3d, צורת הציר החלה להופיע, ואז מספר התאים הנצמדים גדל בהדרגה והפך בהדרגה לצורת ציר. בתרבית של עד שבוע, נוצרה מושבה טיפוסית עם תאי ציר מסביב ותאים עגולים במרכז. כאשר התאים תורבו במשך 14 ימים, צבירי התאים המחוברים ביניהם התחברו בהדרגה ויצרו מבנה דמוי רשת. במקביל, עם העלייה המתמשכת של זמן התרבית, גם תאי הציר הארוכים החלו להתקצר בהדרגה, והראו שינוי טיפוסי דמוי אבן ריצוף.
התאים הדביקים תורבו במשך שבוע אחד ונצפה שמספר התאים במדיום עם פיברונקטין אנושי היה גבוה משמעותית מזה ללא פיברונקטין אנושי, ולא היה שינוי משמעותי במספר התאים בשני המדיומים השונים.
