וואטסאפ

8613968181618

4 סיבות לזיהום במהלך ניסויי PCR

Jan 26, 2022 השאר הודעה

בעקבות התפרצות נגיף הקורונה החדש, הואצה בהדרגה בנייתן של מעבדות להגברת גנים PCR במקומות שונים. זיהוי חומצות גרעין נגיפיות הוא תקן חשוב לאבחון של דלקת ריאות כלילית חדשה. מעבדת PCR, הידועה גם כמעבדת הגברה של גנים, מאמצת טכנולוגיה של ביולוגיה מולקולרית. על ידי הגברה של שברי חומצת גרעין, ניתן להתייחס לזה כשכפול מיוחד של חומצת גרעין במבחנה. מערכת מעקב הגנים משמשת לתפיסת תוכן הנגיף בגוף האדם, ודיוק הזיהוי יכול להגיע לרמת ננומטר. גילוי חומצות גרעין חדשות של קורונה שייך גם הוא לקטגוריה זו של טכנולוגיה ומהווה תקן חשוב לאבחון של דלקת ריאות כלילית חדשה.

מעבדת הגברה של גנים PCR מגבירה בעיקר את תבנית הזיהוי של חומצת גרעין. ניתן לראות כי זיהום צולב צפוי להתרחש במעבדה, וכתוצאה מכך תוצאות חיוביות שגויות בדגימות הבדיקה. לכן, למעבדות PCR יש דרישות ותקנים מחמירים לתכנון.

כיום נעשה שימוש נרחב בטכנולוגיית PCR בתחומי מחלות זיהומיות, מיקוד גידולים, גנטיקה רבייה וכו'. אולם, בשל ההגברה המרובה והגדולה של חומצת הגרעין שתיבדק בטכנולוגיה זו, אפילו כמות קטנה מאוד של זיהום יכולה להוביל בקלות לשני, PCR הדרישות הטכניות גבוהות יחסית, ותהליך הניסוי מסובך. אם יש השמטות בקישורי הביניים, עלולות להיגרם תוצאות שליליות כוזבות.

1. זהו זיהום של מוצרי הגברה של PCR. זה גם הגורם השכיח ביותר לזיהום. לאחר הגברה חוזרת ונשנית של מוצרי PCR, כמות השכפול עולה בהרבה על גבול הזיהוי של PCR, כך שאפילו כמות קטנה מאוד של זיהום מספיקה כדי לגרום לתוצאות חיוביות שגויות בתוצאות הניסוי.

2. זיהום מגיב. במהלך הכנת ריאגנטים, מגע עם מיכלים מזוהמים, פיפטות, קצות פיפטה, תמיסות וכו', עלול להוביל לזיהום של ריאגנטים.

3. הדגימה לבדיקה מזוהמת. המיכל בו מונחת הדגימה מזוהם או שהדגימה מזוהמת עקב איטום לקוי של המיכל; שנית, השימוש בפיפטות מזוהמות או בקצות פיפטה במהלך תהליך מיצוי חומצת הגרעין יוביל לזיהום הדגימה; בנוסף, חלק מהדגימות מכילות וירוסים, אם מתפזרים לאוויר, עלול להתרחש זיהום צולב.

4. זיהום אירוסול. אם התרסיס מכיל וירוסים ומזהמים אחרים ומתפשט לאוויר, סביר מאוד שהוא יגרום לזיהום מוצר PCR. אירוסולים נוצרים על ידי חיכוך בין אוויר לפני השטח של נוזל. פתיחת המכסה, ניעור צינור התגובה ושאיבת חוזרת ונשנית של מדגם הזיהום עלולים ליצור אירוסולים שעלולים להוביל לזיהום צולב. לאחר החישוב, חלקיק אירוסול אחד יכול להכיל 48,000 חלקים, ולכן יש להקדיש תשומת לב מיוחדת לזיהום הנגרם על ידי אירוסול. כל עוד מעבדת ה-PCR מזוהמת, דוח התוצאות הקודם אינו חוקי ולא ניתן לבצע פעולות ניסוי אחרות. יש לזהות את מקור הזיהום ולהסיר אותו ביסודיות על מנת לקבל תוצאות ניסוי מדויקות ויעילות.